Как рассчитывается концентрация ДНК с помощью спектрофотометра?
Как рассчитывается концентрация ДНК с помощью спектрофотометра?

Видео: Как рассчитывается концентрация ДНК с помощью спектрофотометра?

Видео: Как рассчитывается концентрация ДНК с помощью спектрофотометра?
Видео: Введение в спектрофотометрию 2024, Ноябрь
Anonim

Концентрация ДНК является оценивается измеряя оптическую плотность при 260 нм, регулируя A260 измерение мутности ( измеряется абсорбция при 320 нм), умножая к коэффициент разбавления, и с использованием отношения, которые A260 1,0 = 50 мкг / мл чистой дцДНК.

Люди также спрашивают, как вы определяете концентрацию и чистоту ДНК?

Оценить Чистота ДНК измерьте оптическую плотность от 230 до 320 нм, чтобы обнаружить другие возможные загрязнения. Самый распространенный расчет чистоты представляет собой отношение поглощения при 260 нм к показанию при 280 нм. Хорошее качество ДНК будет иметь A260/ А280 коэффициент 1,7–2,0.

Точно так же, что такое хорошая концентрация ДНК? А хороший качественный ДНК образец должен иметь260/ А280 соотношение 1,7-2,0 и A260/ А230 соотношение больше 1,5, но поскольку чувствительность различных методов к этим загрязняющим веществам различается, эти значения следует принимать только в качестве ориентира для определения чистоты вашей пробы.

В связи с этим, как NanoDrop рассчитывает концентрацию ДНК?

Вы умножаете значение оптической плотности при 260 нм на фиксированный коэффициент (50 для ДНК ) и вы получите Концентрация ДНК . Вуаля. (Хорошо, технически это A260 образца толщиной 10 мм, умноженное на 50; NanoDrop выражает A260, как если бы образец был толщиной 10 мм, как в стандартной кювете).

Почему нам пришлось использовать спектрофотометр для количественного определения нашей ДНК?

А спектрофотометр способен определять среднюю концентрацию нуклеиновых кислот ДНК или РНК, присутствующей в смеси, а также их чистота. С использованием закон Бера – Ламберта it является Можно связать количество поглощенного света с концентрацией поглощающей молекулы.

Рекомендуемые: